Как мы выделяли ДНК из клубники

[phyloxena]

А главное - зачем? Никакого нет способа показать в домашних условиях, что это именно она. Тем не менее, yaksher развел подсоленной водой мыло для мытья посуды в двадцать раз, да не на глаз, а в мерном цилиндре и проверяя по донышку мениска, как большой*. После этого он раздавил в застегнутом мешочке клубничину, пока она не превратилась в красную жижу**, добавил 10 мл мыльной воды и еще минут пять месил***. Затем он отфильтровал клубнику через бинт в пробирку****. В пробирку он долил на глаз ледяного изопропилового спирта***** (я его всегда держу в морозилке), и там на глазах собралась отчетливая сопля. Что делать с этим счастьем, я теперь не знаю, поскольку, повторяю, никак не покажешь, что это именно ДНК******

* Лизирущий буфер: мыло разьест клеточные мембраны, соль свернет какие-нибудь белки
** Гомозенизировать клубнику. Клубника мягкая, не надо особенно бороться с клеточными стенками, и октоплоид.
*** Растворить все, что растворяется, и свернуть все, что сворачивается
**** Отсадить нерастворимое. ДНК растворима в воде, даже соленой и мыльной
***** А в спирте, тем более холодном, нерастворима. И чем весокомолекулярнее спирт, тем более нерастворима.
****** Единственный известный мне способ показать присутствие ДНК - краски-интеркаляторы, которые встраиваются между основаниями. Как ясно из принципа дейтвия, канцерогенные и в хозяйстве бесполезные.

Update: Какие-нибудь лет десять назад вся Москва была обклеена рекламой какой-то косметики: "ДНК из самого сердца растений!" А какие-нибудь семьдесят лет назад ученые головы ломали, на что в клетках такое количество нуклеиновых кислот? Решили, буфер.

Comments

[arpad.livejournal.com]

А почему под замком?

[phyloxena.livejournal.com]

По умолчанию. Сейчас открою.

[nastyas.livejournal.com]

Прикольно!
Ну не обязательно интеркаляторы. Можно еще ПЦРом показать не только присутствие ДНК, но и присутствие именно нужной ДНК. Правда, тогда в хозяйстве должны быть специфичные праймеры именно на нужную ДНК, да и амплификатор не помешал бы. :-)))

[irrelative.livejournal.com]

И как же будем показывать присутствие искомой ДНК в ПЦР-ной реакции? ;-)

[phyloxena.livejournal.com]

Да вот, как бы показать :)

[irrelative.livejournal.com]

А вообще, Invitrogen вот такую штуку проталкивает: SYBR Safe. По всяким тестам вроде как... safe, ну или по крайней мере safer чем EBr. И ультрафиолет не нужен: светится в голубом свете.
Красит, впрочем, хреново, что и понятно.

[phyloxena.livejournal.com]

УФ как раз не проблема, но вообще хорошая штука, здорово. Методическая проблема остается: допустим, с капустным соком я могу показать что вот, сода-щелочь, индикатор зеленый, и вода с золы на индикаторе такого же цвета. А тут - вот краска, которая красит то, что мы выделили. А что мы выделили?!

[nastyas.livejournal.com]

Я ответила чуть ниже.

[phyloxena.livejournal.com]

Как ты покажешь, что ПЦР наварил именно ДНК? Какую-то медузу в баночке видно невооруженным глазом без амлификации, но чем этот кисель лучше обычного киселя?

[nastyas.livejournal.com]

А давай купим реал-тайм амплификатор или хотя бы flash-детектор по конечной точке. Там не надо фореза, свечение флуоресцентно меченого специфичного зонда показывает прибор.
На форезе, кстати, РНК тоже будет светиться с этидием, хоть и порушенная в хлам -- причем она будет светиться существенно ярче, чем ДНК, т.к. ее существенно больше и она легче. И еще есть такая засада, что даже если бы вы решили провести форез с этидием в домашних условиях, вы бы, скорее всего, ДНК не увидели, т.к. она в обычный гель не войдет -- геномка слишком здоровая, и у вас она не будет сильно фрагментирована. А уж разглядеть, есть ли там что-то в лунке или что там вообще, не так просто. Мы в лабораторных условиях решали подобную проблему (выделяли ДНК из крови и слюней собак), так на форезе не видно даже в 0.5% агарозном геле. Будет хорошо виден шмер от РНК, а с ДНК будут проблемы.

Так что я голосую за реал-тайм ПЦР. :-)

overkill

[phyloxena.livejournal.com]

Что на форезе будет хвост в лучшем случае, я понимаю. А без этидия все равно не обойдемся :)

Re: overkill

[nastyas.livejournal.com]

Геномка просто не войдет в лунки, так что без рестрикции не понять, есть ли в препарате ДНК вообще...

А с реал-тайм ПЦР или с flash-детекцией обойдемся без фореза и без этидия. В том и прикол этих технологий, что пробирку после ПЦР не надо открывать. :-)

Re: overkill

[phyloxena.livejournal.com]

Ладно, берем. Только дорого. Не берем - нос не дорос.

[nastyas.livejournal.com]

Дорого, да. Ну что ж поделать -- или в этидии полоскаться, непонятно как интерпретировать невнятные картинки, законтаминировать все кругом ДНКой, или платить денех за вполне эстетичный реал-тайм. :-)

[nine_k]

Концентрат ДНК из натуральной клубники!
И, поди, РНК всех сортов там же, и белки всякие?

[phyloxena.livejournal.com]

РНК от такого обращения вся уже посыпалась, а белки должны были хоть отчасти посворачиваться и остаться на марле. Сахар остался, и запах.

[bat-yakov.livejournal.com]

Как я горжусь своими внуками. Читая твою заметку, точно знаю, в чем тут моя заслуга. Собой тоже горжусь

[phyloxena.livejournal.com]

Твоя гордость совершенно оправдана! :) А тебе видно предыдущую запись?

[anyalev.livejournal.com]

Ужасно здорово, даже если нельзя доказать,что это ДНК. А gel какой-нибудь можно в домашних условиях делать?

[(Anonymous)]

Можно, но держать в хозяйстве бромистый этидий не стоит. Кроме того, там грубо выделенная геномная ДНК - получатся просто хвосты такие, никакого разрешения.

[phyloxena.livejournal.com]

Тьфу, вот, что бывает, если писать не под замок. Это я.

[anyalev.livejournal.com]

Ужасно интересно читать всю эту дискуссию по-русски и угадывать слова. Я ведь по-русски этой терминологии не знаю совсем.

Было очень приятно с вами познакомиться. Только мы на ты забыли перейти. По-моему, совершенно зря:)

[phyloxena.livejournal.com]

Ура, давай на ты. Очень приятно!
Очень просто угадывать слова: отбрасываешь окончание и произносишь с английским акцентом :)

[teddee.livejournal.com]

А у меня дочка недавно то же самое проделала.

[phyloxena.livejournal.com]

Зачем? В смысле, при каких обстоятельствах.

[teddee.livejournal.com]

У нас был фестиваль науки на молле, ну и была палатка, где выделяют ДНК из ягод, притащила пробирку с этой соплей домой гордая.

[phyloxena.livejournal.com]

Здорово, я тоже в каком-то таком месте подсмотрела. У меня своя идея - показывать все, что можно показать, из подручных материалов, делать все, что можно, дома на кухне из холодильника и аптечки. Чтобы childlike wonder относилось к вещам действительно удивительным, а в остальном развивалась компетентность.

[teddee.livejournal.com]

Вы знаете, очень кстати именно сегодня я в книжном видел сборник опытов из подручных средств. Не запомнил, как называется, но довольно толстая книженция, и я помню где она лежит, вернусь обязательно купить или найду в библиотеке, напишу, как называется. Я помню как я обожал в детстве такие - у меня было чтото вроде "Химия для любознательных" итп.

Здравствуйте юзеры phyloxena.livejournal.com

[(Anonymous)]

Я чушь тебе мелю, а думаю о нас.И вроде не смотрю а все равно все вижу.Как смотришь ты за мной, и кажется сейчасТы хочешь чтобы я подсела к тебе ближе.
[url=http://eogli.org/фильм-Сериалы-(18).html]Фильмы Сериалы[/url]

Предлагаю искат и писать сюда цитаты дружно

[(Anonymous)]

Самая большая моя ошибка, что я потерял свою любовь.

http://forum.pitchindia.com/profile.php?id=257390

Создание сайтов за один день от 4000 рублей. Без предопла

[(Anonymous)]

Интернет-Сайт без предоплаты!!!

В условиях экономического спада становится актуальным приобретение или создание WEB-сайта.
Созданный сайт поможет Вам привлечь больше клиентов и организовать рекламу своих продуктов или услуг.
Услуга - «Сайт без предоплаты» - это Ваш выбор!!!
Воспользовавшись нашей услугой, Вы абсолютно ничем не рискуете и на выходе получите:

Через один день готовый сайт фирмы (7-10 страниц) от 4000 руб. (в стоимость входит оплата доменного имени, оплата хостинга на 12 месяцев и подбор шаблона сайта 2-3 варианта);
Через один день Вы сможете начать рекламировать Ваш товар или услуги и получать с него прибыль;
Через один день готовый сайт интернет-магазина (без наполнения товаром) от 7000 руб.
Персональную электронную почту для Вашего сайта.
Оплата за сайт происходит после его изготовления через платежные терминалы.
Услуги по продвижению и раскрутки сайта оговариваются отдельно.

Подробная информация на нашем сайте и http://niuibis.ru

Предварительные заявки и техническое задание на создание сайтов и интернет-магазинов можно направлять на email: ag622512@ya.ru,
по телефонам 8 (499) 681-01-05, 8 (985) 298-60-52
или по Skype - newteno1

[lucky-duckk.livejournal.com]

А если не секрет то дорого это сколько? Сколько стоит норм ртПЦРка?

[phyloxena.livejournal.com]

Честно говоря, не знаю. Надо спросить у работающих людей - irrelative или nastyas.

ПЦР реального времени не дешев

[cordek.livejournal.com]

650000 р у Синтола
плюс наборы по 10000 р на 100 реакций

шиповальный пистолет СибЕк Каменец-Подольский

[(Anonymous)]

http://megasto.com.ua/vakuumnye-nasosy/ Вакуумные насосы
шипы UGIGRIP Лисичанскшиповальный пистолет СибЕк Ивано-Франковскшипы UGIGRIP Каменец-Подольскийшипы UGIGRIP Алчевскшипы UGIGRIP Кременчуг
067-50-44-185

Курсы кройки и шитья, модельеров, поваров, вышивки, кур

[(Anonymous)]

[img]http://www.matiola.com.ua/images/kursi/modelirovanie/38.jpg[/img]

Милые женщины и девушки!

Наша фирма «Матиола» основана в 1993 году. Вся наша деятельность посвящена миру прекрасного. Мы обучаем женщин и девушек разнообразным видам рукоделия; искусству кулинарии; уходу, развитию и воспитанию детей; а так же домоводству.
Все эти и другие виды творчества всегда помогали женщинам находить свое призвание, отдушину и возможность самовыражения. Милые женщины приглашаем вас в мир творчества и искусства!

[url=http://matiola.com.ua/]рукоделие стиль рококо[/url]

[url=http://matiola.com.ua/kursi-list-id/guvernantok-njan.html]школа матиола[/url]

[url=http://matiola.com.ua/]вязание спицами для мужчин[/url]

[url=http://matiola.com.ua/gallery/kroyka-i-shitya.html]крой и шитье работы[/url]

Оффшорные (offshore) компании - консультации, регистрация

[(Anonymous)]

[b]Компания Intelligent Solution[/b] - была основана профессионалами, специализирующимися в области международного консалтинга и налогового планирования и обладающими опытом работы в консалтинговых и банковских сферах.
Наша цель – предоставление максимально качественного сервиса по минимальным ценам. Наше преимущество – мы не работаем по шаблонным схемам.
Для каждого клиента мы разрабатываем индивидуальные схемы согласно поставленным задачам и целям.
Именно поэтому в результате выводится эффективная схема, которая будет максимально соответствовать задачам и достигать поставленных целей.


[b]Оффшоры и оффшорные компании[/b]

Оффшоры (или оффшорные зоны) – это зоны, где иностранным компаниям предоставляются специальные льготы, в том числе и налоговые. Такая схема действует для привлечения в такие зоны иностранного капитала. Это надежный и законным инструмент бизнес, в котором есть главное правило: компания не должна проводить на территории страны регистрации хозяйственную деятельность


[b]Компания Intelligent Solution предлагает такие услуги:[/b]

регистрация и комплексное сопровождение оффшорных компаний;
регистрация компаний в низконалоговых и респектабельных юрисдикциях;
перевод ранее зарегистрированных компаний под наше обслуживание;
предоставление сертификата Good Standing,
в том числе предоставление этого сертификата для компаний зарегистрированных в Белизе и на Сейшеллах не через Intelligent Solution Ltd;
предоставление услуг номинальных директоров, секретарей и акционеров;
открытие офисов, виртуальных офисов, представительств и филиалов;
открытие счетов в иностранных банках;
аудит (бухгалтерское сопровождение) Кипрских и Гонконгских компаний;
защита активов;
оптимизация налогообложения;
международное налоговое и корпоративное планирование;
помощь в оформлении вида на жительство в Латвии.

[b]Контакты:[/b]

Сайт : http://www.int-solution.com
Мейл : intelligent.solution@yahoo.com
Icq : 642566426

Forte love – это возбудитель для женщин без цвета и запаха

[(Anonymous)]

Forte love – это возбудитель для женщин без цвета и запаха 3 капли в бокал и женщина ваша ..
http://greatbutik.ru/